1、小鼠固定，将小鼠尾巴拉直。前期操作使用的是50 mL的离心管自制的小鼠固定器，操作起来很不方便，建议购买小鼠固定器，网上有很多，价格不贵，但对于新手来说会省去很多麻烦。这一步的关键点在于小鼠尾巴要拉直。
2、尾静脉扩张。我个人认为这一步是能否成功的最关键一步，回过头了想想，前期的操作不成功大部分原因都是在扎针前小鼠的尾静脉没能够充分扩张。尾静脉扩张的方法很多，最常用的是擦酒精和泡温热水，我一直用的是擦酒精，但为了能让小鼠尾静脉充分扩张，往往还需要用收加紧小鼠尾巴，使血液充盈。再次重复，尾静脉充分扩张是提高成功率的关键步骤。
3、扎针位置及角度。网上大部分的说法都是在尾端1/3-1/4处开始第一针，如果失败还可以继续往上扎针。我个人来说，第一针的位置在1/2往上，这个就根据自己的爱好来就好，因为到后期基本都是一针成功，而且我的实验也不需要短期内多次给药。至于扎针的角度，0-30度的说法网上都有，而且都能取得较好的成功率，说明扎针的角度并没有非常的标准化，各有优劣。平行进针，只需要扎针往前推进行，但需要找好进针位置；而15-30度的角度进针，针尖1/2-2/3部分刺入皮下后需要一个针头上挑的过程，否则容易刺穿血管。
