1、首先，取一管的感受态细胞于冰上冻融后，在无菌条件下加入一定量的连接产物或质粒，其中20ng/pL的DNA加入1PL即可。
2、然后，轻轻混匀后，在冰浴条件下30min，同时设置两个对照:其中一个在相同条件下加人10ng 已知质粒作阳性对照，也可同时检测感受态细胞效价，每pg 质粒DNA 转化出的菌落数。
3、然后，在另一个实验组中加lpL无菌水作阴性进行对照，在42C水浴条件下进行静置热激90S。
4、然后，在热激后迅速将管转移至冰浴中，冰浴条件下静置2~5min。
5、然后，在管中加人600PL 的LB液体培养基，在37"条件下，在200r/min振荡温育45 min，使细菌复苏。
6、最后，按照适当的体积梯度，将细菌液拐宥鹗釜铺于含Amp.X- gal 和IPTG 的琼脂平板上，待液体完全浸人培养基后，倒置平板在37C培养12~16h。
